實(shí)驗(yàn)室以及野外如何檢測(cè)熒光蛋白GFP RFP

更新時(shí)間：2022-05-19 點(diǎn)擊次數(shù)：3324次

對(duì)蛋白亞細(xì)胞定位的認(rèn)知可能表明，蛋白可能在許多細(xì)胞進(jìn)程中發(fā)揮作用。如果與下面所列的其中一種細(xì)胞器特異性試劑共定位，那么可確認(rèn)目的蛋白的亞細(xì)胞位置。雖然這些細(xì)胞器標(biāo)記物可用作強(qiáng)大的免疫熒光工具，但它們還可用作碎裂細(xì)胞裂解物的蛋白質(zhì)印跡對(duì)照。

這些蛋白的表達(dá)可能在不同細(xì)胞和組織中有所不同。

熒光蛋白的發(fā)光原理在于其發(fā)色基團(tuán)經(jīng)一定波長(zhǎng)的光（激發(fā)光）照射后被激活，并將能量以光能形式釋放，這時(shí)我們就能在熒光顯微鏡下看到日思夜想的熒光色啦！

但由于能量不能全以光的形式輻射出來，所以熒光蛋白的發(fā)射光（熒光）的波長(zhǎng)比激發(fā)光長(zhǎng)。

那么我們是怎么將熒光蛋白分類的呢？通常，人們按發(fā)射波長(zhǎng)來分類并定義其顏色（下圖）。

RFPs（紅色熒光蛋白）：

mCherry具有優(yōu)異光穩(wěn)定性，通用紅色單體（但融合表達(dá)時(shí)有較弱的齊聚效應(yīng)）

tdTomato具有mCherry相同的光穩(wěn)定性，亮度強(qiáng)，是追蹤表達(dá)水平的理想選擇，但為串聯(lián)二聚體，可以在融合標(biāo)簽大小不干擾蛋白質(zhì)功能的情況下使用

mStrawberry信號(hào)亮的紅色單體，但光穩(wěn)定性要弱于mCherry

DsRed是細(xì)胞毒性小的RFP

mApple在蛋白的融合表達(dá)中是mCherry不錯(cuò)的替代物，但其光穩(wěn)定性要遠(yuǎn)弱于mCherry

mKate2從參數(shù)方面考量是綜合亮度、光穩(wěn)定性和齊聚性的RFP。

OFPs（橙色熒光蛋白）：

mOrange橙色單體

YFPs（黃色熒光蛋白）：

mVenus是亮度*的黃色單體

GFPs（綠色熒光蛋白）：

EGFP

BFPs（藍(lán)色熒光蛋白）：

mTagBFP2穩(wěn)定，成熟快、亮度極亮的藍(lán)色單體

上面是通用一些熒光蛋白參數(shù)，再好的載體也需要找對(duì)合適的光源，光源的選擇對(duì)于載體信號(hào)的激發(fā)也是*的，美國(guó)LUYOR公司實(shí)驗(yàn)室儀器事業(yè)部致力于研究和開發(fā)熒光觀測(cè)裝備，其產(chǎn)品系列有 LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀測(cè)燈，LUYOR-3430、LUYOR-3260單熒光蛋白觀測(cè)手電筒。熒光是各種各樣細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)系統(tǒng)學(xué)及其他領(lǐng)域研究中的一種強(qiáng)大和廣泛使用的工具。LUYOR的LUYOR-3415RG和LUYOR-3430、LUYOR-3260除了可用于篩選轉(zhuǎn)基因生物外，還可以用于樣本的預(yù)篩選、輔助解剖、用于珊瑚研究等

LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀察燈的用途：

用于檢測(cè)、篩選轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白（GFP）和紅色熒光蛋白（DsRed）基因的植物、動(dòng)物及微生物，如水稻、玉米、斑馬魚、小鼠、細(xì)：菌、真菌等等...